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链球菌可根据病史、症状及病变作初步诊断。确诊必须作细菌的分离鉴定。易在血液琼脂上从血液、肝、脾和其他病料中分离到链球菌（作诊断时，必须做2只或2只以上病鸡的细菌分离培养。由于粪便链球菌一般在培养基上很难生长，所以必须使用选择生长培养基）。Domermuth和Gross的鉴别培养基有助于肠链球菌的分离和和鉴定。从感染组织中发现兽疫链球菌和粪链球菌，即可作出诊断。兽疫链球菌属于Lancefield氏C血清学型，而肠球菌为D型。Sharpe和Shattock描述了在D型鉴定血清学群的方法。 　　此外，应注意与禽霍乱、鸡白痢及其他败血性疾病相区别。

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